实验管理之发酵罐使用及灭菌技巧


 

一、发酵罐灭菌操作方法
常用的灭菌技术一般分为；物理灭菌和化学灭菌。物理灭菌又包括湿热灭菌、干热灭菌、射线灭菌法和过滤灭菌等。而化学灭菌主要是使用化学试剂(如甲醛、苯酚、新洁尔灭、过氧乙酸、高锰酸钾等)进行某些容器或物料以及无菌区域的灭菌。在生物发酵方面，常用的设备是机械搅拌式发酵，其杀菌效果的好坏直接影响到发酵是否能正常进行。
发酵罐的清洗
发酵罐使用前后都应认真清洗，特别是前后两次培养采用不同的菌株时，更应注意清洗和杀菌工作。发酵罐内可进行清洗的任何部分都应认真清洗，否则都可能成为杂菌的滋生地。易被忽略而不能充分清洗的地方有喷嘴角内部与取样管内以及罐顶等处。
种子培养基及培养条件
蛋白胨10g，葡萄糖40g，蒸馏水100ml，pH自然。500ml三角瓶装液量100ml，115℃，灭菌20min。
培养条件：用接种环从保存斜面中接一环至三角瓶中，150r/min，28℃，摇瓶培养48h。
发酵罐的组装工作
① 连接好冷却水管。若采用自来水冷却，连接部要充分牢固，并且注意连接管管径与自来水管管径一致，尽可能采用耐压管。
②由于通入的空气有一定压力，应注意连接压缩空气的管子应能承受一定压力。
③安装pH及溶解氧等检测装置，注意各接线口不要出现差错。由于操作过程要和水打交道，故线路连接一定要注意安全，要特别注意防止漏电。
发酵罐灭菌
1、 取样口上连接一段硅胶管，在硅胶管上安装节流夹，以防止培养基在灭菌是流出。
2、装入发酵罐溶积60%的培养基(成分同种子培养基)后，将发酵罐放入灭菌釜内，在115℃下，灭菌20min。当灭菌完成后，温度降到60℃以下时，打开灭菌釜，确认发酵罐上所连接的管路完好后，将罐去除。尽快将通气管接好，确认排气口正常后，以0.3-0.5L/min通入空气。接通冷却水管路，开搅拌在低速下进行培养基的冷却。

二、日常使用发酵罐注意事项及操作技巧
1、发酵罐必须确保所有单件设备能正常运行时使用本系统。
2、发酵罐在消毒过滤器时，流经空气过滤器的蒸汽压力不得超过0.17MPa，否则过滤器滤芯会被损坏，失去过滤能力。
3、发酵罐在发酵过程中，应确保罐压不超过0.17MPa。
4、发酵罐在实消过程中，夹套通蒸汽预热时，必须控制进汽压力在设备的工作压力范围内，否则会引起发酵罐的损坏。
5、发酵罐在空消及实消时，一定要排尽发酵罐夹套内的余水。否则可能会导致发酵罐内筒体压扁，造成设备损坏；在实消时，还会造成冷凝水过多导致培养液被稀释，从而无法达到工艺要求。